食品中添加剂检测前处理过程十分繁琐，之前介绍过食品中维生素ade的方法，通过双三元液相全自动在线二维分析技术，可以省去繁重的离线制备过程，分析效率得以飞速提升[1]。此次赛默飞针对低含量vb12添加的饲料检测，同样轻松应对难题，解放双手，工作效率倍增。
饲料维生素检测难点
现行有效的国标方法主要有“添加离子对试剂的反相液相色谱分析方法”以及“使用氨基柱的色谱分析方法”[2] [3],可前者见vb12的色谱保留存在难点，离子对色谱法平衡时间较长；后者氨基柱法需特别注意柱子的使用范围，对于习惯使用普通c18柱分析的用户而言不太适应。
国标对于低添加vb12预混合饲料的指导(样品溶液中维生素b浓度小于2μg/ml)，需要进行离线的样品富集、净化步骤，常用手段包括固相萃取以及免疫亲和法[3][4]，首先需要进行一次富集处理，多批次样品送检过程繁琐且时间较长。
对症下药——双三元液相在线富集、除杂
使用赛默飞双三元液相系统，样品只需简单超声过滤即可大体积直接上样富集、除杂、分析，整个过程全部实现自动化。下面是双三元液相在线富集、除杂、分析的自动化工作流程：
样品净化
转移 / 分离
分离 / 再生
赛默飞双三元特色方案介绍
赛默飞基于双三元液相平台开发了维生素b全自动在线样品富集测定方法，样品超声后过滤即可直接上样测定。
相比采用离子对色谱冗长的平衡时间，该法具有分析时间短，峰形良好的优点。
thermo scientific™ ultimate™ 3000
双三元系统
双三元系统测试结果[5]：
vb12标准溶液色谱图
vb12实际样品溶液色谱图
本方法重现性良好，连续6次进样重现性rsd=0.48%，且通过色谱柱优化，相对于国标方法而言，峰形更加良好(参见下图国标方法色谱图)，且自动化程度高，大大提升了分析效率。
维生索b标准色谱图(氨基柱)见图a.1；维生素b标准色谱图(c柱)见图a.2。
图a.1 10μg/ml 维生索b标准溶液色谱图(氨基柱)
图a.2 10μg/ml 维生索b标准溶液色谱图(c柱)
参考文献：
【1】在线二维液相色谱法同时测定婴幼儿和成人配方营养品中的维生素a、d3和e (张艳海，其布勒哈斯等， 色谱， vol.33 no.3 291-297)
【2】gbt9841-2006: 饲料添加剂维生素b12粉剂
【3】gbt17819-2017:添加剂预混合饲料中维生素b12的测定液相色谱法
【4】gbt5009.217-2008:保健食品中维生素b12的测定
【5】an_19026_hplc_食品_ultimate 3000 在线净化富集法测定预混合饲料中vitamin b12?
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